大定风珠对帕金森病模型小鼠脑黑质小胶质细胞活化及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

作者：崔拓拓; 曹俊岭; 欧阳竞锋^*; 尹梦霞; 刘鑫; 孙梦菲

来源：中医杂志, 2023, 64(09): 930-938.

DOI：10.13288/j.11-2166/r.2023.09.012

• 帕金森病
• 大定风珠
• 小胶质细胞
• 多巴胺能神经元
• TLR4/MyD88/NF-κB信号通路

目的 探讨大定风珠对帕金森病神经损伤的影响及可能作用机制。方法 84只C57BL雄性小鼠随机分为正常组、模型组、多巴丝肼组及大定风珠低、中、高剂量组，每组14只。除正常组外，其余各组小鼠每天腹腔注射鱼藤酮2.5 mg/kg连续28天复制帕金森病小鼠模型。造模同时大定风珠低、中、高剂量组分别给予大定风珠混悬液5、10、20g/（kg·d）灌胃，多巴丝肼组给予多巴丝肼混悬液0.034 g/（kg·d）灌胃，正常组和模型组小鼠给予生理盐水0.08 ml灌胃，均每日1次，共28天。灌胃结束后对各组小鼠进行旷场实验（包括水平运动总距离、中央区域运动总距离、静止时间）、爬杆实验（包括转身时间及爬杆总时间）评价小鼠行为学改变；高效液相色谱法检测小鼠纹状体多巴胺（DA）、5羟色胺（5-TH）水平；HE染色法观察小鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经细胞病理改变；免疫组化法检测黑质致密部、纹状体酪氨酸羟化酶（TH）表达；免疫荧光法检测黑质致密部α-突触核蛋白（α-synuclein）、离子钙结合衔接分子1 (Iba-1)表达；蛋白免疫印迹法检测纹状体Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子88 (MyD88)、核转录因子κB p65 (NF-κB p65)、磷酸化核转录因子κB p65 (p-NF-κB p65)蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠水平运动总距离和中央区域运动总距离明显减少、静止时间延长（P<0.01），爬杆实验转身时间及爬杆运动总时间显著延长（P<0.01）；小鼠纹状体DA、5-HT含量减少，TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达明显上调（P<0.05或P<0.01）；黑质DA能神经细胞数量明显减少，排列紊乱且胞体皱缩；纹状体和黑质致密部TH阳性表达显著减少，α-synuclein、Iba-1荧光强度显著增强（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较，大定风珠中、高剂量组小鼠水平运动总距离增加、静止时间减少，爬杆实验转身时间及爬杆运动总时间显著缩短（P<0.05或P<0.01）；纹状体DA、5-HT含量增加，TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达明显减少；黑质DA能神经细胞数量增加，排列有序，TH阳性表达显著增加，α-synuclein、Iba-1荧光强度减弱（P<0.05或P<0.01）。与多巴丝肼组比较，大定风珠中、高剂量组α-synuclein、Iba-1荧光强度及MyD88蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）。结论 大定风珠可缓解鱼藤酮对DA能神经元的神经毒性，抑制小胶质细胞活化，其机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

• 单位
  北京中医药大学东方医院; 北京中医药大学东直门医院; 中国中医科学院医学实验中心