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摘要
目的 ：探讨慢病毒介导补体C3沉默载体转染人B淋巴细胞Raji-成骨细胞系MG63共培养体系对共培养体系成骨能力的影响及其作用机制。方法：构建慢病毒补体C3沉默载体，转染人B淋巴细胞Raji后建立体外Raji-成骨细胞系MG63共培养体系，分为空白对照组（不做特殊处理）、补体C3沉默组（慢病毒补体C3沉默载体转染共培养体系）与模型组（慢病毒空载载体转染共培养体系）。培养24 h后，采用反转录酶-聚合酶链锁反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）法及Western-Blot法检测各组补体C3表达水平；各组分别培养0、3、6、12、24、48、72 h后采用CCK-8检测各组成骨细胞系MG63增殖能力；培养24 h后分别采用流式细胞术检测各组成骨细胞系MG63的细胞凋亡情况，采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）检测盒检测各组MG63细胞AKP活力，采用Western-Blot法检测各组成骨细胞系MG63的骨保护素（osteoprotegerin,OPG）蛋白表达水平。结果：RT-PCR法检测结果显示补体C3沉默组C3表达水平低于空白对照组和模型组；Western-Blot法检测结果显示补体C3沉默组C3表达水平低于空白对照组和模型组；CCK-8检测结果提示培养3、6 h后补体C3沉默组MG63增殖能力与空白对照组、模型组比较差异无统计学意义；培养12 h后补体C3沉默组成骨细胞系MG63增殖能力高于空白对照组和模型组；培养24、48、72 h后补体C3沉默组成骨细胞系MG63增殖能力高于空白对照组和模型组；流式细胞术检测结果提示补体C3沉默组成骨细胞系MG63的细胞凋亡水平低于空白对照组和模型组；AKP检测盒检测结果提示补体C3沉默组AKP活力高于空白对照组和模型组；Western-Blot法检测结果提示补体C3沉默组OPG蛋白表达水平高于空白对照组和模型组。结论：补体C3的沉默能够增强成骨细胞系MG63的骨形成能力，并且发挥这种能力需要时间的累积。补体C3可能通过改变OPG/RANKL/RANK轴来影响成骨能力。
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单位第二临床医学院; 浙江中医药大学
