HSV-tk和H60基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

作者：卢善明; 邓汪东; 薛玲

来源：汕头大学医学院学报, 2010, (01): 25-28.

• 自杀基因
• NKG2D配体
• 载体构建
• 逆转录病毒科 suicide gene
• NKG2D ligand
• vector construction
• retroviridae

目的:构建携带自杀基因HSV-tk和免疫相关基因H60的逆转录病毒载体pIRES-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60。方法:以质粒pUC19-H60为模板,用PCR方法扩增H60基因,并亚克隆至pMD18-T载体,构建中介载体pMD18-H60。双酶切质粒pMD18-H60和tgCMV/HyTK,获得H60和TK基因片段,再克隆至逆转录载体pIRES,构建重组载体pIRES-H60和pIRES-TK。然后把H60基因片段克隆至载体pIRES-TK,构建重组载体pTK-IRES-H60。转染重组载体至包装细胞PA317进行病毒包装,用病毒液感染NIH3T3细胞,检测病毒液的滴度。...

• 单位
  中山大学附属第一医院; 汕头大学医学院第一附属医院