RNAi介导的GdHsp60和GdHsp70基因沉默对沙葱萤叶甲幼虫抗寒性的影响

作者：张宏玲; 任浩; 李凯旋; 田宇; 张恒; 李艳艳; 李玲; 庞保平; 谭瑶^*

来源：昆虫学报, 2022, 65(07): 807-817.

DOI：10.16380/j.kcxb.2022.07.003

• 沙葱萤叶甲
• 热激蛋白
• GdHsp60
• GdHsp70
• RNAi
• 抗寒性

【目的】本研究旨在比较不同RNAi方法对沙葱萤叶甲Galeruca daurica幼虫热激蛋白基因(GdHsp60和GdHsp70)的沉默效率，以选择一种可高效降低靶基因表达水平的研究方法，明确这两个热激蛋白在沙葱萤叶甲幼虫抗寒性中的作用。【方法】分别通过饲喂法和显微注射法进行RNAi沉默沙葱萤叶甲1和2龄幼虫的GdHsp60和GdHsp70,采用qPCR检测GdHsp60和GdHsp70的沉默效率；通过显微注射法分别对GdHsp60和GdHsp70进行RNAi后24 h,用热电偶法测定沙葱萤叶甲2龄幼虫过冷却点和结冰点，生物测定沙葱萤叶甲2龄幼虫暴露于不同低温条件下(-6～-14℃) 2 h的半致死温度(Ltemp50)以及在-5℃低温条件下处理不同时间后的半致死时间(Ltime50)。【结果】用饲喂法和显微注射法进行RNAi均可以降低GdHsp60和GdHsp70的表达水平，但显微注射法的沉默效率更高。与对照组(显微注射dsGFP)相比，沙葱萤叶甲2龄幼虫分别显微注射dsGdHsp60和dsGdHsp70 24 h后，GdHsp60和GdHsp70的表达水平均降至最低，分别降低了84.15%和92.38%。在沙葱萤叶甲2龄幼虫中，显微注射dsGdHsp60 24 h后其过冷却点、结冰点、Ltemp50及Ltime50值分别为-10.56±0.42℃,-7.66±0.56℃,-8.33℃和49.25 h,显微注射dsGdHsp70 24 h后其过冷却点、结冰点、Ltemp50及Ltime50值分别为-9.08±0.23℃,-6.09±0.28℃,-8.20℃和52.21 h,而对照组的分别为-14.71±0.11℃,-13.94±0.09℃,-10.63℃和87.13 h。与对照组(显微注射dsGFP)相比，在沙葱萤叶甲2龄幼虫分别显微注射dsGdHsp60和dsGdHsp70 24 h后过冷却点、结冰点和Ltemp50显著上升，而Ltime50值显著缩短。【结论】显微注射法可作为沙葱萤叶甲Hsp相关基因RNAi的主要干扰方法；沉默GdHsp60和GdHsp70基因均会显著降低了沙葱萤叶甲幼虫的抗寒能力。

• 单位
  内蒙古农业大学