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摘要
本研究针对副结核分支杆菌（MAP）F57基因特异性保守序列，设计RPA引物和nfo探针，建立了快速检测MAP的结合侧流层析试纸条的肉眼可视化RPA检测方法（RPA-LFS）。结果显示，所建立的RPA-LFS方法在金属浴中39℃恒温振荡反应20 min后，将产物加至侧流层析试纸条中，可在5 min内实现对检测结果的肉眼可视化判定；所建立的RPA-LFS方法特异性强，仅对MAP产生扩增，与其他常见可引起牛腹泻的病原均无交叉反应；以含有F57基因全长的重组质粒pTOPO-T-F57作为模板，RPA-LFS的检出限为12 copies。进一步应用RPA-LFS方法对57份牛腹泻临床样本进行MAP检测，检出9份阳性结果，与实时荧光PCR方法检测结果一致。本研究建立的副结核分支杆菌可视化RPA-LFS方法操作简单，反应快速，不依赖于复杂精准的仪器设备、专业技术人员和严格的实验室环境条件，为养殖场一线的MAP现场检测提供了一种新的解决方案。
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