降钙素介导CD36、IL-17的表达对创伤性骨关节炎的影响

作者：曾锦威; 黄浩; 何元平

来源：中国卫生标准管理, 2024, 15(4): 144-149.

DOI：10.3969/j.issn.1674-9316.2024.04.034

• 创伤性骨关节炎
• 降钙素
• CD36
• IL-17
• 软骨细胞
• 炎症反应

目的 探讨降钙素对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞的保护作用并进一步研究其可能的机制.方法 2022 年 7 月 21 日—11 月 10 日以人软骨细胞为研究对象,使用不同浓度降钙素处理后,采用CCK-8 试剂盒(cell counting kit CCK 8,CCK-8)实验筛选出降钙素最佳作用浓度进行后续实验.将人软骨细胞分为对照组、疾病组、治疗组,采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术分析CD36表达和活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产生情况,酶标法检测各组细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测降钙素、白介素-17(interleukin-17,IL-17)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP13)、Ⅱ型胶原(type Ⅱ collagen,Col Ⅱ)的mRNA相对表达量,蛋白印迹法(Western blot)检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor heat protein domain associated protein 3,NLRP3)、消皮素D(gasdermin-D,GSDMD)、GSDMD-N的蛋白表达水平.结果 人软骨细胞的活力对降钙素呈浓度依赖性,后选择50 nM浓度的降钙素进行细胞实验.疾病组细胞伴随Col Ⅱ的mRNA相对表达量为(0.47±0.06)、CD36 阳性率为(0.17±0.02)%、SOD为(151.14±12.26)U/mL,低于对照组的(1.00±0.09)、(1.50±0.16)%、(242.33±21.17)U/mL(P＜0.05);与对照组比较,疾病组细胞中MMP13 和IL-17 mRNA相对表达量、ROS的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)及MDA含量升高;同时,NLRP3 和GSDMD的蛋白表达水平上升,而GSDMD-N蛋白表达水平下降.然而,降钙素的使用能够逆转IL-1β诱导软骨细胞引起的上述一系列指标变化.Pearson分析显示,降钙素与CD36 表达呈正相关(r= 0.922,P= 0.001),与IL-17 呈负相关(r=-0.881,P= 0.002),CD36 与IL-17 的表达水平呈负相关(r=-0.650,P= 0.023).结论 降钙素对IL-1β诱导的软骨细胞损伤具有保护作用,其作用机制与介导CD36、IL-17 的表达,缓解软骨细胞的应激炎症反应有关.