蒲公英甾醇对AFB1所致鸡原代肝细胞氧化损伤的保护作用

作者：鲁萍; 王萌; 桑锐; 王巍; 张雪梅^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(09): 3541-3549.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.09.010

• 黄曲霉毒素B1(AFB1)
• 蒲公英甾醇
• 鸡原代肝细胞
• 氧化应激
• 保护作用

【目的】探讨蒲公英甾醇对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的鸡原代肝细胞氧化损伤的保护作用及机制，为应用蒲公英甾醇防治AFB1中毒提供理论依据。【方法】采用组织块酶消化法分离鸡原代肝细胞并进行PAS糖原染色鉴定，通过CCK-8法绘制肝细胞生长曲线；通过MTT法测定AFB1对鸡肝细胞的毒性，结合测定肝细胞上清液中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平，以确定AFB1的体外建模浓度。通过MTT法确定蒲公英甾醇的安全给药浓度后，将试验分为6组：空白对照组、模型组、蒲公英甾醇剂量组(高、中、低剂量组)、阳性对照组。建立AFB1诱导的鸡原代肝细胞损伤模型并给予药物，通过试剂盒测定细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及还原型谷胱甘肽(GSH)水平。通过实时荧光定量PCR法测定Keap1/Nrf2信号通路关键基因血红素加氧酶-1(HO-1)、NADPH醌氧化还原酶1(NQO1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)和核转录因子E2相关因子2(Nrf2)表达量。【结果】试验成功分离鉴定鸡原代肝细胞，在培养24～72 h细胞活力较高；确定0.05μg/mL作为AFB1体外诱导鸡原代肝细胞损伤的建模浓度；确定20、10、5μg/mL作为蒲公英甾醇高、中、低剂量组的给药浓度；与模型组相比，蒲公英甾醇可极显著降低AFB1所致鸡原代肝细胞氧化应激相关指标ROS和MDA含量(P<0.01),极显著提高抗氧化物SOD活性(P<0.01);极显著或显著提高AFB1所致鸡原代肝细胞中HO-1、NQO1和Nrf2基因(除低剂量组外)表达量(P<0.01;P<0.05),降低Keap1基因表达量。【结论】蒲公英甾醇通过调控鸡原代肝细胞Keap1/Nrf2信号通路提高其抗氧化能力，从而对AFB1诱导的鸡原代肝细胞氧化损伤起到保护作用。

• 单位
  延边大学附属医院; 延边大学