高致病性美人鱼发光杆菌美人鱼亚种胞外产物的毒力特性分析

作者：李永杰; 于永翔; 王印庚; 王春元; 刘定远; 张浩; 张正^*

来源：微生物学报, 2022, 62(08): 2995-3006.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20210717

• 美人鱼发光杆菌美人鱼亚种
• 胞外产物
• 毒力特性
• 细胞毒性
• 许氏平鲉

【目的】美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacterium damselae subsp. damselae,PDD)是一种可导致多种海洋生物患病的重要病原菌。本研究以从我国海水养殖环境中分离的具有强磷脂酶活性、强溶血性表型且具有高致病性的2株PDD菌株为研究对象，分析PDD菌株胞外产物(extracellularproducts,ECP)的致病性及细胞毒性，及其与菌株致病性表型的相关性。【方法】利用培养基平板法测定菌株PDD1605、PDD1608的ECP体外磷脂酶活性和溶血性；通过人工感染实验测定PDD1605和PDD1608活菌株及其ECP对许氏平鲉的致病性，并进行组织病理切片观察组织的病理损伤；通过向人胚肾细胞系HEK293T和小鼠成纤维细胞系MCFS等2种培养细胞中添加菌株PDD1605和PDD1608的ECP测定其对哺乳动物的细胞毒性。【结果】人工感染PDD1605和PDD1608活菌株对许氏平鲉均表现为高致病性，5×108CFU/mL的菌液浓度24h内受试鱼全部死亡；菌株PDD1605和PDD1608的ECP对许氏平鲉同样表现为高致病性，受试鱼的死亡曲线与感染活菌株的死亡曲线趋势基本一致；病理切片观察发现，感染ECP后许氏平鲉组织发生明显病变，主要表现为肠黏膜层组织崩解，心脏心肌炎性细胞浸润，肝脏血细胞和炎性细胞浸润，脾脏出现血铁蛋白沉积等；2株PDD菌株的ECP也具有体外强溶血活性和强磷脂酶活性，与菌株的毒力特性基本一致；2株PDD菌株的ECP对人胚肾细胞系HEK293T和小鼠成纤维细胞系MCFS具有细胞损伤作用，均使体外培养的细胞体积萎缩，形成了圆形细胞簇等退行性变化。【结论】通过体外测定溶血性、磷脂酶活性，许氏平鲉人工感染实验和病理切片观察，以及细胞毒性研究，证实2株高致病性PDD菌株的致病性表型与其ECP致病性表型和细胞毒性高度一致，从而说明ECP是高致病性PDD菌株的重要致病机制之一。

• 单位
  中国水产科学研究院黄海水产研究所; 上海海洋大学; 生命学院