LPA对牦牛卵丘细胞扩张因子HAS2、PTGS2和PTX3表达的影响

作者：刘斌; 王萌; 潘阳阳^*; 王靖雷; 徐庚全^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 1-11.

• 牦牛
• 溶血磷脂酸
• 卵丘细胞
• 卵丘扩张因子

本研究以溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid， LPA)在卵丘细胞扩张中的作用为切入点，旨在探讨不同浓度LPA对牦牛卵丘细胞(yak cumulus cells， YCCs)中卵丘扩张因子(透明质酸合成酶2(hyaluronate synthase 2， HAS2)、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2， PTGS2)和正五聚蛋白3(pentraxin 3， PTX3))表达的影响。本研究以健康成年(3～4岁)雌牦牛的YCCs为研究对象，取对数生长期的YCCs，将不同浓度的LPA(空白对照、阴性对照、5 、15 、30和50 μmol·L-1作用于体外培养的YCCs，分别培养12、24、36、48 h后，CCK-8检测YCCs的细胞活性，采用RT-qPCR和Western-blot法检测YCCs中HAS2、PTGS2和PTX3 mRNA和蛋白相对表达量，细胞免疫荧光染色法检测卵丘扩张因子HAS2、PTGS2和PTX3在YCCs中的分布。试验中每个处理组3个重复。结果显示，LPA孵育12、24、36和48 h，对YCCs的活性有着明显的促进作用。当孵育时间为24 h时，LPA对YCCs活性的促进作用最明显。而相比较于对照组而言，当LPA浓度为15 μmol·L-1时，不同孵育时间中YCCs的活性提升最为显著(P<0.05)。随着LPA浓度的增大，YCCs中HAS2、PTGS2和PTX3 mRNA和蛋白的相对表达量逐渐增高。当LPA浓度为15 μmol·L-1时，与空白对照组相比，HAS2、PTGS2和PTX3的mRNA和蛋白相对表达量最高(P<0.05)，且YCCs中HAS2、PTGS2和PTX3的荧光强度明显增强。当LPA浓度大于15 μmol·L-1时，HAS2、PTGS2和PTX3的mRNA和蛋白相对表达量逐渐下降。本研究表明，LPA对YCCs活性具有促进作用。当孵育时间为24 h，并且LPA浓度为15 μmol·L-1时，活性提升最为显著(P<0.05)。LPA可以增强YCCs中卵丘扩张因子HAS2、PTGS2、PTX3的表达，且其作用浓度具有剂量依赖性，最佳浓度为15 μmol·L-1。研究结果为阐明LPA促进牦牛卵丘细胞扩张的分子机制提供了理论依据，为进一步提高牦牛卵母细胞的质量和体外受精(in vitro fertilization， IVF)成功率提供理论基础。

• 单位
  甘肃农业大学