摘要
目的 观察猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响方法 用LRRC15蛋白刺激健康仔猪外周血PBMC和脾脏CD4+T细胞,分析T细胞免疫应答水平:(1)在PHA处理下,以RPMI 1640、ESA、ConA为对照组,用LRRC15蛋白刺激PBMC,流式检测CD4+、CD8+T淋巴细胞数量比例变化,以及CD4+CD25+Foxp3+、CD8+CD25+Foxp3+Treg细胞表达水平;(2)在有和无LPS存在下,用LRRC15蛋白刺激PBMC,ELISA检测培养上清中IL-10含量;(3)分别于加入LRRC15蛋白后24、48、72 h检测初始CD4+Th细胞分化情况。分离仔猪脾脏CD4+T细胞并与未成熟髓源性DC共培养,采用ELISA方法检测加入LRRC15蛋白24、48、72 h培养上清中的IL-4、IL-5、IL-10、IL-17、IFN-γ水平。结果 LRRC15蛋白刺激PBMC后,CD4+T淋巴细胞数量比例显著增加(P<0.05),并诱导CD4+CD25+Foxp3+、CD8+CD25+Foxp3+Treg表达(均P<0.05),但不能诱导IL-10的分泌。LRRC15蛋白分别作用于CD4+T细胞24、48、72 h, PBMC细胞IL-4、IL-17分泌水平显著降低(均P<0.05);LRRC15蛋白诱导24与48 h相比,PBMC细胞分泌IL-5水平升高(P<0.05);诱导72 h的IL-5水平与48 h时比较差异无统计学意义(P<0.05);LRRC15蛋白诱导IFN-γ水平升高(P<0.05),诱导24、48、72 h时的分泌水平差异无统计学意义(P>0.05);LRRC15蛋白于CD4+T细胞24、48、72 h均不能诱导IL-10分泌(均P>0.05)。结论 LRRC15蛋白可诱导仔猪PBMC中CD4+/CD8+T细胞免疫失衡,诱导Treg细胞表达,通过非依赖性IL-10途径发挥免疫抑制作用,并诱导早期Th1型免疫应答和后期Th1/Th2混合型免疫应答。
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