联合利用嵌套缺失和酚筛选法构建和鉴定目的基因的缺失突变体

作者：程璘令; 李冰; 涂洪斌; 刘启才; 冉丕鑫

来源：现代临床医学生物工程学杂志, 2006, 12(03): 288-290.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2006.03.017

• 嵌套缺失法
• 酚筛选法
• 缺失突变体

目的介绍一种快捷、无突变的目的基因缺失体构建和鉴定方法。方法用MluI和SacI酶将GCLC/pGL3在GCLC基因与pGL3连接处切开,形成以GCLC端为3’凹端而pGL3载体端为3’凸端的线型载体。利用外切核酸酶Ⅲ从GCLC基因端(3’凹端)单向逐一切除GCLC基因上的核苷酸,并在不同的时间终止其反应以获得一系列的GCLC基因缺失体。将GCLC基因缺失体与pGL3载体自身环化构建成GCLC基因序列缺失体的pGL3报道载体。最后用酚抽提和凝胶电泳法粗略挑选出不同长度的GCLC/pGL3缺失突变体。结果利用嵌套缺失法构建出各种长度的GCLC基因的缺失突变体,且不存在基因突变的现象。利用酚筛选法快速鉴定出29种不同长度的缺失突变体。结论联合利用嵌套缺失和酚筛选法可以高保真而快速地构建和鉴定目的基因的缺失突变体。

• 单位
  广州医学院; 广州医学院第一附属医院广州呼吸疾病研究所