Yes相关蛋白1对胃癌顺铂化疗敏感性的影响及作用机制初探

作者：杨振^*; 张红珠; 张伟; 付婷婷

来源：国际医药卫生导报, 2021, 27(21).

• Yes相关蛋白1
• 胃癌
• 顺铂
• 化疗敏感性
• 细胞增殖

目的探索性研究Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1, YAP1)对胃癌细胞SGC-7901生物学行为能力及顺铂化疗敏感性的影响, 分析相关作用机制。方法于2019年1月至2020年12月采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot, WB)检测正常胃上皮黏膜细胞GES1和胃癌细胞SGC-7901中YAP1相对表达量表达差异。实验分为沉默(Lv-shRNA-YAP1)组、阴性对照(Lv-shRNA-NC)组、空白对照组, 构建YAP1沉默重组慢病毒颗粒Lv-shRNA-YAP1和阴性对照Lv-shRNA-NC分别转染胃癌细胞SGC-7901, 空白对照组不做任何处理, 分别采用细胞计数8(Cell Counting Kit-8, CCK8)实验、划痕实验、Transwell实验观察YAP1对胃癌细胞增殖、运动、迁移、侵袭等生物学行为能力的影响;向3组细胞加入不同浓度顺铂溶液, 采用CCK8实验检测各组细胞存活率及顺铂对细胞的半数有效抑制浓度(IC50), 取空白对照组、Lv-shRNA-YAP1组细胞加入IC50顺铂溶液, 进一步分为空白对照组、Lv-shRNA-YAP1组、顺铂组、Lv-shRNA-YAP1+顺铂组, 采用RT-PCR实验和WB实验比较4组细胞中YAP1及其下游靶基因胰岛素样生长因子(insulin like growth factor, IGF)、苏氨酸蛋白激酶(prote in k inase B, Akt)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)表达情况。结果与正常胃上皮黏膜细胞GES1[mRNA(1.00±0.03), 蛋白(1.00±0.02)]比较, YAP1在胃癌细胞SGC-7901中呈高表达[mRNA(6.43±0.43), 蛋白(2.54±0.13)], 差异均有统计学意义(t=11.821、8.371, 均P<0.05)。空白对照组胃癌细胞在24 h、48 h、72 h的增殖能力分别为(0.44±0.05)、(0.72±0.05)、(0.97±0.04), 细胞运动距离(82.32±4.53)%, 细胞迁移及侵袭能力分别为(543±43)个、(586±54)个, Lv-shRNA-NC组分别为(0.40±0.05)、(0.68±0.04)、(0.92±0.05)、(84.42±5.42)%、(523±51)个、(573±54)个, Lv-shRNA-YAP1组胃癌细胞在24 h、48 h、72 h的增殖能力均明显降低[分别为(0.34±0.04), (0.52±0.04), (0.73±0.05), 均P<0.05], 细胞运动距离明显较小[(51.42±5.31)%, P<0.05], 细胞迁移及侵袭能力均明显降低[分别为(432±44)个、(485±53)个, 均P<0.05]。当顺铂浓度为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μg/ml时, Lv-shRNA-YAP1组胃癌细胞SGC-7901存活率均明显低于空白对照组和Lv-shRNA-NC组细胞(均P<0.05);Lv-shRNA-YAP1组顺铂对细胞的IC50为(1.48±0.33)μg/ml, 明显低于空白对照组和Lv-shRNA-NC组[分别为(4.43±0.32)μg/ml, (4.18±0.42)μg/ml, 均P<0.05]。空白对照组细胞中IGF、Akt、TGF-β的mRNA和蛋白相对表达量分别为(1.00±0.03)、(1.00±0.02)、(1.00±0.04), (1.00±0.02)、(1.00±0.04)、(1.00±0.03), Lv-shRNA-YAP1组分别为(0.58±0.03)、(0.62±0.03)、(0.39±0.03), (0.78±0.03)、(0.73±0.03)、(0.74±0.05), 顺铂组分别为(0.67±0.02)、(0.73±0.03)、(0.40±0.02), (0.72±0.04)、(0.74±0.04)、(0.77±0.05), Lv-shRNA-YAP1组和顺铂组细胞中IGF、Akt、TGF-β的mRNA和蛋白相对表达量明显优于空白对照组细胞(均P<0.05), Lv-shRNA-YAP1+顺铂组细胞中IGF、Akt、TGF-β的mRNA和蛋白相对表达量[(0.70±0.02)、(0.68±0.03)、(0.34±0.04), (0.51±0.03)、(0.46±0.03)、(0.55±0.05)]则明显低于Lv-shRNA-YAP1组和顺铂组(均P<0.05)。结论 YAP1蛋白在胃癌细胞SGC-7901中高表达, 靶向沉默YAP1蛋白可有效改善胃癌细胞SGC-7901对顺铂的敏感性, 抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭, 其机制可能与IGF、Akt、TGF-β表达下调有关。