A/U富集片段RNA结合蛋白的固相纯化与鉴定

作者：孙达权; 王莹; 刘定干

来源：生物化学与生物物理进展, 2013, (04): 386-391.

• C/EBPβ3′UTR
• A/U富集RNA
• hnRNPC
• 核酸-蛋白质相互作用 C/EBPβ 3'UTR
• A/U-rich RNA
• interaction between nucleic acid and protein

RNA与细胞靶蛋白结合是RNA发挥其生物学功能的重要基础,因此,分离和鉴定RNA结合蛋白是研究RNA功能的必要步骤.目前,RNA结合蛋白的分离和鉴定方法较多,但各有优缺点.本实验利用可溶性碳二亚胺(EDC)介导的缩合反应,将A/U富集片段RNA共价偶联到固相介质amine M-270上,再用固定化RNA经亲和层析从细胞抽提物中分离纯化RNA结合蛋白,并以SDS-PAGE联合质谱分析和Western blotting等方法鉴定RNA特异性结合蛋白.最后通过荧光原位杂交和共聚焦显微镜证明这些RNA特异性结合蛋白确与RNA在细胞内结合.实践证明这一方法简单、高效、易于掌握.

• 单位
  中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所; 分子生物学国家重点实验室