长牡蛎电压门控钙离子通道β亚基的无标签亲和层析纯化

作者：刘凤华; 王淏; 贾乔雅; 毕允晨

来源：海洋科学, 2022, 46(02): 87-96.

• 电压门控钙离子通道
• β亚基
• 蛋白纯化
• 亲和层析
• 多组氨酸

亲和层析是一种广泛使用的蛋白质分离纯化技术,常用的亲和标签包括谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签、多组氨酸(polyhistidine)标签等。然而,外源亲和标签可能会影响蛋白质的结构与功能,通常需要酶切去除,造成实验流程加长、产率降低。某些蛋白质具有与亲和标签相似的氨基酸序列特征,利用这种序列特征尝试无标签纯化可有效避免上述问题。本研究选取C端天然富含组氨酸残基的长牡蛎电压门控钙离子通道(VGCC) β亚基进行无标签亲和层析纯化,结果显示,氨基三乙酸镍(Ni-NTA)能够特异性地结合无标签的β亚基,且结合能力与多组氨酸标签相当。对β亚基C端组氨酸残基分组突变后发现,随着组氨酸残基突变的增多,各突变型β亚基与Ni-NTA的结合能力逐步下降。免疫印迹实验结果表明, β亚基C端(HG)7序列在针对多组氨酸标签的抗体识别中发挥关键作用。VGCCβ亚基的这种天然序列特征也可应用于该膜蛋白复合体提取过程关键步骤的监测。综上,本研究对氨基酸序列中具有亲和标签特征的蛋白质进行了无标签亲和层析纯化,为具有相似特征蛋白质的分离纯化提供了参考。

• 单位
  中国科学院海洋研究所; 中国科学院大学