异烟肼耐药结核病体外巨噬细胞模型的诱导与构建

作者：庞慧; 魏林; 王家超; 郭旭霞; 闫林芳; 徐慧美; 弓艳娥; 马翠卿^*

来源：免疫学杂志, 2022, 38(11): 936-943.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20220131

• 结核病
• 异烟肼
• 耐药性
• 巨噬细胞
• 体外实验

目的 运用浓度梯度倍增的异烟肼体外诱导获得BCG耐药菌株，并构建体外BCG感染巨噬细胞模型。方法 选取野生型BCG，从1/8最低抑菌浓度开始，在异烟肼浓度倍增的7H9培养基上进行传代培养，逐步诱导菌株对异烟肼的耐药性；采用微量肉汤稀释法，进行BCG药敏实验；通过耐药基因测序来验证耐药诱导是否成功；通过PMA刺激Thp1细胞，诱导分化成M0巨噬细胞；运用CCK实验，进行BCG感染巨噬细胞的细胞活性测定；通过流式细胞术分析野生型BCG或异烟肼耐药BCG感染巨噬细胞的极化状态。结果 野生型BCG的MIC值为0.125μg/ml，异烟肼耐药BCG的MIC值>128μg/ml；异烟肼耐药基因inhA和katG测序后比对发现，inhA有T→G突变，katG有A→T突变；CCK实验确定合适的感染复数（multiplicity of infection,MOI）为=10；异烟肼耐药BCG较野生型BCG感染巨噬细胞后，其向M1型极化减少。结论 采用异烟肼浓度梯度倍增方式，成功诱导了耐药BCG；确定了耐药BCG感染巨噬细胞的感染复数，为研究体内异烟肼耐药结核病提供了良好的体外细胞模型。

• 单位
  长治医学院; 河北医科大学