以重组TACE胞外功能域从噬菌体随机肽库中筛选TACE的抑制肽

作者：黄巍; 李凌波; 韩玲; 张慧; 杨渝珍

来源：生物工程学报, 2005, (01): 30-35.

DOI：10.13345/j.cjb.2005.01.008

• 肿瘤坏死因子转换酶
• 胞外功能域
• 噬菌体展示
• 抑制肽

肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)是加工裂解TNF α前体的关键酶 ,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽 ,首先制备筛选靶分子 ,用RT PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区 (T80 0 )和整个胞外区 (T130 0 ) ,然后分别克隆至pET 2 8a和pET 2 8c中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达出带有His tag的目的蛋白 ,两者均为包涵体 ,变性复性后过Ni2 + NTA亲和层析柱得到纯度达 90 %的重组蛋白。以纯化的重组T80 0和T130 0分别筛选噬菌体展示随机 15肽库 ,对筛选克隆进行ELISA检测、竞争抑制实验和序列分析。从两个独立的筛选过程中得到一个相同的阳性克隆序列“TRWLVYFSRPYLVAT” ,固相Fmoc法合成该短肽 ,观察其在LPS诱导人单核细胞产生sTNF α中的作用。结果表明 ,筛选到的短肽可显著抑制TACE的活性 ,减少TNF α的分泌 ,抑制率可达 6 0 3% ,为抗炎小分子药物的设计和改造提供线索和依据。

• 单位
  华中科技大学同济医学院