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摘要
背景氧浓度变化诱导产生视网膜新生血管,并导致细胞DNA损伤反应。以往认为促血管生成因子过度表达是血管新生的原因,但DNA损伤是否与视网膜新生血管有关尚不清楚。目的探讨参与DNA损伤修复的磷酸化蛋白γH2AX与小鼠视网膜血管新生的关系。方法应用72只17日龄C57BL/6J小鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变(OIR)模型组、OIR阳性对照组和OIR阴性对照组,每组18只。视网膜铺片免疫荧光法对比观察视网膜新生血管形态学变化及γH2AX表达情况。将人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为正常对照组、低氧模型对照组、阳性干扰组和阴性干扰组。细胞处理后12 h,采用免疫荧光法比较并分析各组γH2AX的表达情况,采用Western blot法定量检测各组γH2AX的表达。结果正常对照组、OIR模型组、OIR阳性对照组和OIR阴性对照组17日龄小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积比较,总体差异均有统计学意义(F=437.62、93.05,均P<0.01),其中OIR模型组和OIR阴性对照组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较正常对照组明显增大;OIR阳性对照组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较OIR模型组和OIR阴性对照组明显减小,差异均有统计学意义(均P<0.01)。17日龄小鼠视网膜γH2AX焦点团聚集出现情况与新生血管和无灌注区面积大小变化趋势相一致。正常对照组、低氧模型对照组、阳性干扰组和阴性干扰组HUVECs中γH2AX焦点阳性细胞百分数比较,差异有统计学意义(F=64.97,P<0.01),其中低氧模型对照组和阴性干扰组γH2AX焦点阳性细胞百分数均较正常对照组明显增大,差异均有统计学意义(均P<0.01);阳性干扰组均较低氧模型对照组和阴性干扰组明显减小,差异均有统计学意义(均P<0.01)。各组HUVECs间γH2AX的表达量与免疫荧光趋势相一致。结论缺氧环境下,γH2AX在小鼠视网膜血管和体外培养的HUVECs中均大量表达。γH2AX的表达与视网膜血管新生有关。低氧诱导的DNA损伤修复反应可能与视网膜血管新生有一定关系。
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