结核分枝杆菌Rv0859基因的克隆、表达、纯化及蛋白的亚细胞定位

作者：刘岩岩; 马国举; 廖海印; 张鹭; 王洪海

来源：微生物学通报, 2009, (01): 84-89.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.2009.01.028

• 结核分枝杆菌Rv0859
• 克隆
• 表达
• 纯化 Mycobacterium tuberculosis
• Rv0859
• Clone
• Expression
• Purified

本研究体外克隆了结核分枝杆菌Rv0859基因,融合表达并纯化了Rv0859蛋白。首先提取H37Rv标准菌株中的基因组DNA,设计Rv0859基因两端的引物,以H37Rv基因组DNA为模板通过PCR方法扩增Rv0859基因。用HindIII和BamHⅠ两种限制性内切酶双切Rv0859基因,T4连接酶连接到pET30载体上,再转入大肠杆菌JF1125中,经过筛选鉴定后抽提质粒测序,得到重组正确载体,转化到表达宿主大肠杆菌BL21中。用IPTG进行诱导表达,通过聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及质谱鉴定重组表达蛋白。0.05mol/L浓度的IPTG37°C诱导4h重组蛋白的表达量最高。制备重组蛋...

• 单位
  复旦大学; 生命科学学院; 齐齐哈尔大学; 遗传工程国家重点实验室