添加扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法的建立与应用

作者：张德福; 赵禹宗; 付绪磊; 张明; 仪淑敏; 徐永霞; 殷喆; 李春; 励建荣

来源：食品与发酵工业, 2016, 42(09): 192-196.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201609033

• 单增李斯特菌
• 聚合酶链式反应
• 检测方法
• 扩增内标
• 内化素基因

以单增李斯特菌inl A基因为靶基因,设计一对特异性引物,以16S rRNA为扩增内标对照,建立了一种含有扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法。优化了PCR反应体系,并对PCR检测方法的特异性、灵敏度、人工污染样品及食品样品检测效果进行了测试。对2株单增李斯特菌、1株英诺克李斯特菌以及19株非李斯特菌菌株进行PCR检测,结果显示,只有2株单增李斯特菌能被检出大小为826 bp的特异性片段,其余20株细菌只能检出1 500 bp的扩增内标片段。灵敏度实验结果显示,基因组DNA和纯培养物的最低检出限分别为1.80×102fg/μL和1.21×102CFU/m L。当人工污染牛乳样品中单增李斯特菌在最低接种量为0.48 CFU/m L时,经8 h增菌培养后可被该方法检出。采用该研究建立的检测方法对36种食品样品进行检测,证实了该检测方法可以指示检测过程中出现的假阴性现象。综上所述,该研究建立的PCR检测方法能特异性的检测单增李斯特菌,并可有效排除检测过程中出现的假阴性现象,提高检测的准确性。

• 单位
  数理学院; 军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 渤海大学