SFTSV实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作者：于志亚; 杨鸣发; 马云云; 康洪涛; 姜骞; 刘家森; 李广兴^*; 曲连东^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(03): 292-297.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0054

• 发热伴血小板减少综合征病毒
• TaqMan探针
• 实时荧光定量RT-PCR

为建立快速、灵敏的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)检测方法，根据GenBank中发热伴血小板减少综合征病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)基因的保守序列设计引物和探针。通过对反应体系和反应条件的优化，建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。当质粒标准品浓度为4.22×102～4.22×109copies/μL时，荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系，相关系数可达0.999 8。该方法对发热伴血小板减少综合征病毒最低检测限为4.22×101copies/μL，灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍；该方法可特异性地检测出SFTSV，而对同科其他病毒检测结果均为阴性；批内、批间变异系数均小于2%。对采集的200只蜱进行检测，阳性检出率为3.5%，而常规RT-PCR方法的阳性检出率为2%。研究结果表明，本研究建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好，为发热伴血小板减少综合征的检测提供了技术手段。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 东北农业大学; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所