博尔纳病毒核蛋白的原核表达、纯化及鉴定

作者：霍康; 谢鹏; 徐鸣明; 张晓东; 展群岭; 杨德雨; 胡永波

来源：免疫学杂志, 2009, 25(04): 385-388.

• 博尔纳病毒
• 核蛋白
• 原核表达

目的构建、表达、并纯化重组博尔纳病毒核蛋白(Borna disease virus,BDV),并鉴定该蛋白。方法通过PCR反应从博尔纳病毒cDNA中扩增博尔纳病毒核蛋白P40基因,构建博尔纳病毒核蛋白P40基因重组质粒pET-14b-BD-VP40,转化大肠杆菌,IPTG诱导融合蛋白的表达,His-tag亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;Western-blot法鉴定该蛋白。结果成功构建重组质粒pET-14b-BDVP40,酶切鉴定、核酸序列分析正确,亲和层析纯化后纯度可达90%,Western-blot表明重组蛋白能与博尔纳病毒核蛋白单克隆抗体特异性结合。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的pET-14b-BDVP40融合蛋白,为进一步研究博尔纳病毒核蛋白作用机制及开发相应血清学检测试剂盒提供基础。

• 单位
  神经内科; 重庆医科大学附属第一医院