豚鼠抗α-毒素抗体的制备及对酵母展示疫苗的检测

作者：石铭; 刘小雪; 张静; 陈静; 邵小光^*

来源：中国医师进修杂志, 2019, (10).

• 抗体
• α-毒素
• 免疫荧光共聚焦
• 酵母表面展示

目的 制备豚鼠抗α-毒素血清、纯化抗重组金黄色葡萄球菌α-毒素的IgG并应用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测,检测酵母表达α-毒素情况。方法 免疫豚鼠,给豚鼠静脉注射重组α-毒素,制备抗α-毒素血清,利用HiTrap protein A HP纯化抗重组金黄色葡萄球菌α-毒素IgG,SDS-PAGE非还原性电泳检测纯化的IgG。酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光共聚焦检测酵母表达α-毒素情况。结果 成功获得了豚鼠抗α-毒素血清及所需的抗α-毒素抗体。非还原性电泳观察到未纯化的血清中抗α-毒素抗体浓度较低,穿透峰中抗α-毒素抗体含量较少,洗脱峰中抗α-毒素抗体的纯度约为85%。ELISA法检测发现,转化子1、2号与阴性对照组相比较,基本可以判断转化子经过诱导表面展示了α-毒素；免疫荧光共聚焦检测发现,经过抗α-毒素抗体染色,1号酵母转化子表面发出绿色荧光而未诱导培养基的细胞表面没有荧光。结论 金黄色葡萄球菌α-毒素在酵母表面展示成功,可以进一步应用于生物医学临床或学术研究领域,同时可为研发酵母展示疫苗提供可靠的鉴定方法。

• 单位
  大连市中心医院; 大连大学