NMM抗肿瘤DNA疫苗原液大肠杆菌菌体蛋白质残留量检测方法的建立与验证

作者：郭润姿; 伊君梅; 孙澳; 田园; 车亦伟; 邱创钧; 王宇^*

来源：中国医药科学, 2023, 13(09): 85-89.

• 抗肿瘤DNA疫苗
• 重组生物制品
• 双抗原夹心ELISA法
• 大肠杆菌菌体蛋白残留
• 质量控制

目的 建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法 使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量，采用四参数logstic曲线进行回归分析，并对该方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证，验证通过对5批样品进行检测。结果 采用双抗体夹心ELISA试验方法进行大肠杆菌蛋白质残留量检测时，DNA疫苗原液无需进行稀释。NMM抗肿瘤DNA疫苗原液对大肠杆菌菌体蛋白质的检测无干扰及抑制作用，方法的专属性良好；本法检测限为0.41 ng/ml；定量限为0.98 ng/ml；该方法测定宿主菌蛋白质残留量在0～100 ng/ml范围内线性良好，R2≥0.9999；本方法重复性试验中宿主菌蛋白质含量RSD值均低于15%，中间精密度实验中样品吸光值RSD值低于10%，精密度结果良好。在检测线性范围内加入高、中、低3种浓度的大肠杆菌菌体蛋白，回收率均值为100.35%(n=9,RSD=3.58%)；本方法检测实验条件发生微小变动时（不同人员、不同批次试剂盒），对测定结果的影响在可接受范围内。应用该方法对5批NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌蛋白质残留量进行检测，大肠杆菌菌体蛋白残留量均在1 ng/mg左右，远低于相关指导原则中规定的不高于1μg/mg的质量标准。结论 该方法可用于NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中宿主菌蛋白质含量的检测。

• 单位
  固安鼎泰海规生物科技有限公司