山奈酚对激素诱导的股骨头坏死中内皮细胞的保护作用研究

作者：徐鑫; 范骁宇; 吴鑫杰; 时利军; 王培旭; 高福强; 孙伟^*; 李子荣

来源：中国修复重建外科杂志, 2022, 36(10): 1277-1287.

• 山奈酚
• 地塞米松
• 股骨头坏死
• 骨微血管内皮细胞

目的 通过体外实验探讨山奈酚对糖皮质激素诱导的股骨头坏死（glucocorticoids-induced osteonecrosis of the femoral head,GIONFH）中骨微血管内皮细胞（bone microvascular endothelial cells,BMECs）的作用。方法 从股骨颈骨折患者自愿捐赠的股骨头或股骨颈松质骨中分离BMECs，并行CD31、血管性血友病因子免疫荧光染色和体外成管实验鉴定。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法筛选地塞米松（dexamethasone,Dex）抑制细胞活性的最佳浓度及时间点和改善Dex抑制活性的最佳山奈酚浓度；然后将实验分为4组，分别为单纯细胞组（A组）、加入最佳浓度Dex组（B组）、加入最佳浓度Dex+1μmol/L山奈酚组（C组）和加入最佳浓度Dex+5μmol/L山奈酚组（D组）。采用EdU实验、体外成管实验、TUNEL实验、AnnexinⅤ/碘化丙啶（propidium iodide,PI）实验、Transwell迁移实验、划痕实验和Western blot检测山奈酚对Dex干预后BMECs增殖、成血管、凋亡、迁移和蛋白表达的影响。结果 经鉴定所培养细胞为BMECs。CCK-8法检测示Dex抑制BMECs活性的最佳浓度及时间点为300μmol/L作用24 h，改善Dex抑制活性的最佳山奈酚浓度为1μmol/L。EdU和成管实验结果示B～D组细胞增殖率、成管长度和分支点数目显著低于A组，B、D组显著低于C组，差异均有统计学意义（P<0.05）。TUNEL和Annexin V/PI凋亡检测结果显示，B～D组TUNEL阳性细胞率和细胞凋亡率显著高于A组，B、D组显著高于C组，差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示，B～D组划痕愈合率和细胞迁移数显著低于A组，B、D组显著低于C组，差异均有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测示，B～D组Cleaved Caspase-3和Bax蛋白相对表达量显著高于A组，B、D组显著高于C组；B～D组基质金属蛋白酶2、Cyclin D1、Cyclin E1、VEGFA和Bcl2蛋白相对表达量显著低于A组，B、D组显著低于C组；差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 山奈酚可减轻GIONFH中BMECs的损伤和功能障碍。

• 单位
  中日友好医院; 北京大学; 中国医学科学院; 北京协和医学院