负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

作者：陈陵; 蔡永国; 郑兴春; 杨仕明; 房殿春; 罗元辉; 王东旭

来源：解放军医学杂志, 2006, (01): 38-41.

• 肝素酶
• 腺病毒科
• 复制缺陷型腺病毒载体
• 转染

目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Adhpa)。方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Adhpa,并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Adhpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml。电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制。PCR双引物鉴定Adhpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段。结论成功包装了负盘。

• 单位
  第三军医大学西南医院