刚地弓形虫RH株速殖子外泌体的分离与鉴定

作者：凌薇; 宋玉洁; 汪慧; 朱昱蓉; 袁琳; 马雨润; 程芳; 姜旭淦; 陈盛霞^*

来源：江苏大学学报(医学版), 2020, 30(03): 239-247.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y200053

• 刚地弓形虫
• 外泌体
• 分离
• 鉴定
• 共培养
• 纳米颗粒跟踪分析

目的:分离与鉴定刚地弓形虫(Toxoplasma gondii) RH株速殖子外泌体。方法:收集弓形虫速殖子与人结肠癌SW480细胞共培养上清液,经离心、过滤,采用基于聚合物沉淀技术的试剂盒法分离外泌体;透射电镜观察外泌体形态特征,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测外泌体粒径大小,蛋白质印迹法检测外泌体经典标志分子CD63、HSP70以及弓形虫特异蛋白表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)、棒状体蛋白16(rhoptry protein 16,ROP16)、ROP18和致密颗粒蛋白1(dense granule protein 1,GRA1)。结果:从弓形虫与细胞共培养上清液中分离出囊泡样物质,其外形为圆形,有完整的膜结构,直径为30～150 nm;表达外泌体特异性蛋白CD63、HSP70;检测出弓形虫特异性蛋白SAG1、ROP16、ROP18和GRA1。结论:从弓形虫速殖子与SW480细胞共培养上清液中获得弓形虫外泌体。

• 单位
  江苏大学