破伤风毒素单克隆抗体的制备及鉴定

作者：陈洋洋; 刘栋琦; 张惟材; 熊向华^*; 张秀娟^*

来源：军事医学, 2021, 45(08): 603-607.

• 破伤风毒素
• 抗体,单克隆
• 腹水制备
• 亲和力常数

目的一株抗破伤风毒素鼠源单克隆抗体的制备与鉴定。方法从实验室前期以破伤风类毒素为抗原筛选得到的6株稳定细胞株中选取4E12进行制备及鉴定,首先将4E12细胞株扩大培养后腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,经Protein G柱和PD10脱盐柱两步纯化鼠源单抗;其次通过SDS-PAGE电泳检测抗体纯度并通过分型试剂盒鉴定抗体轻重链亚型,免疫印迹法鉴定抗体结合区域及表位类型,非竞争ELISA法测定抗体亲和力常数以及小鼠中和实验评价抗体中和活性。结果获得能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株4E12,其细胞培养上清效价为4×103,抗体轻重链分别为κ型和IgG1型,CDR3序列分别为SQSTHVPPT和ARKGTGTGFNY;4E12腹水抗体效价为3.2×104,抗体经纯化后纯度>95%,以线性表位与TeNT/Hc结构域特异性结合,两者的亲和力常数为3.6×10-10mol/L,小鼠中和实验结果显示,4E12抗体可部分中和破伤风毒素。结论筛选到一株高亲和力的鼠源单抗,为破伤风毒素检测及中和抗体研发奠定了基础。

• 单位
  哈尔滨商业大学