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摘要
目的制备可检测全长SUN5的特异性抗体,并用该抗体检测SUN5蛋白在人类生殖细胞中的表达。方法通过生物信息学比较SUN5与新剪切体SUN5β之间的差异,在差异区域设计合成短肽,制备SUN5多克隆抗体并纯化。用新制备的SUN5抗体对Ntera-2细胞中的SUN5蛋白进行Western blotting和免疫荧光检测,验证抗体的特异性;最后,用该抗体对人睾丸细胞涂片进行检测,观察SUN5蛋白在人生殖细胞中的表达。结果成功合成了SUN5短肽,而且用该短肽制备了SUN5多克隆抗体。Western blot结果显示,新制备的SUN5特异性抗体可检测到全长SUN5蛋白。免疫荧光实验结果表明,在Ntera-2细胞中SUN5蛋白定位在核膜和胞浆。通过对人睾丸细胞涂片的检测发现,SUN5在睾丸精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达。结论成功制备了SUN5特异性抗体,该特异性抗体的制备对于深入研究SUN5的功能具有重要的意义。此外,发现SUN5蛋白在精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达,提示SUN5蛋白可能在精子发生中发挥着重要的生理功能。
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