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摘要
为研究融合表达肿瘤靶向肽(RGD)、细胞穿膜肽(TAT)和白树毒素(GEL)基因重组减毒沙门菌对乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外抑制作用,将重组质粒载体pEGFP-RGD-TAT-GEL导入至减毒沙门菌LH430中,构建了重组减毒沙门菌LH430-RGD-TAT-GEL。经PCR、双酶切鉴定正确后,将重组菌转染MDA-MB-231细胞,提取总RNA后进行反转录,采用PCR技术检测目的基因的转录情况,细胞增殖毒性试验检测重组菌对MDA-MB-231细胞和HEK-293细胞的抑制率。结果显示:被重组菌转染后的MDA-MB-231细胞经RT-PCR检测,目的基因高效表达,对MDA-MB-231细胞最佳抑制条件为细菌浓度1×108 CFU/μL,转染时间为48 h,且半数抑制浓度为4.643×107CFU/μL。本试验为研究细胞穿膜肽、核糖体失活蛋白和细菌联合治疗肿瘤的后续动物试验提供试验支持。
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