鸡耳蜗EFNA2基因RNAi慢病毒载体的构建及其靶基因离体沉默效率

作者：余佳; 向明亮; 吴皓; 沈晨凌

来源：听力学及言语疾病杂志, 2012, (02): 155-159.

DOI：10.3969/j.issn.1006-7299.2012.02.017

• EFNA2基因
• RNAi
• 慢病毒
• 鸡原代听神经细胞 EFNA2
• RNA interference
• Lentivirus
• Primary auditory neuron in chicken

目的构建鸡耳蜗EFNA2基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,在离体培养原代鸡听神经细胞中鉴定其沉默效率。方法针对鸡EFNA2基因序列设计特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点,构建慢病毒pFU-GW-iRNA载体,将筛选所得有效短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体在293T细胞中包装成病毒颗粒,随后将其感染离体培养原代鸡听神经细胞,最后采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率。结果 PCR克隆鉴定及测序结果显示所构建的shRNA慢病毒载体正确无误,包装病毒后的滴度为2.0×109 TU/ml,分别命名为...

• 单位
  上海交通大学; 上海交通大学医学院附属新华医院