沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用

作者：胡国君; 张尊平; 范旭东; 任芳; 翟秀丽; 时晓燕; 董雅凤^*

来源：中国果树, 2022, (08): 39-43.

DOI：10.16626/j.cnki.issn1000-8047.2022.08.009

• 葡萄
• 沙地葡萄茎痘伴随病毒
• 巢式RT-PCR
• 双重巢式RT-PCR

根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒（grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV）全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cp F1/R1→cpF2/R2，扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和c DNA用量的优化，以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化，建立了GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法。采用该方法对109份葡萄样品进行检测，结果显示，2对普通PCR引物RSP 52/53和RSP 9F/9R的合计检出率为65.1%,2组单一巢式PCR引物repF1/R1→repF2/R2和cp F1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%，而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%。该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本，适用于大量田间样品的检测。

• 单位
  中国农业科学院果树研究所