人羊膜上皮细胞的体外培养及标志分子的检测分析

作者：刘小勇; 周清; 张晓玲; 秦晓艳; 王雯婕; 王黎; 孟晶; 陈剑

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2014, 30(12): 1318-1321.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.007187

• 羊膜上皮细胞
• 细胞培养
• 胚胎干细胞

目的进行人羊膜上皮细胞(HAEC)的体外培养,观察其生物学特性,检测其分子特征。方法取剖宫产术后人羊膜,应用酶消化法获得HAEC,倒置显微镜下观察细胞生长变化;CCK-8法检测HAEC的生长曲线;Giemsa染色观察HAEC的克隆形成率;流式细胞术检测HAEC的细胞周期;取第2代HAEC,流式细胞术检测其CD29、CD31、CD44、CD59、CD105、CD117、CD133、HLA-DR的表达。免疫荧光法检测其CD9、上皮性钙黏素(E-cadherin)、足糖萼素样蛋白(PODXL)、阶段特异性胚胎表面抗原4(SSEA-4)、性别决定区Y相关因子2蛋白(SOX2)、SSEA-1、Nanog蛋白、八聚体结合蛋白3/4(Oct-3/4)的表达情况。结果酶消化法可以获得较纯的HAEC,细胞呈贴壁生长,呈多角形,核呈圆形。细胞在贴壁后第3天进入指数生长期。细胞周期分析显示66%处于G0/G1期,S期细胞占31.69%,G2/M期细胞占2.31%。HAEC的克隆形成率为(9.33±2.00)%。流式细胞仪检测显示HAEC阳性表达CD44、CD29、CD105、CD59,不表达CD31、CD117、CD133、HLA-DR。免疫荧光法检测显示HAEC表达胚胎干细胞相关分子CD9、E-cadherin、PODXL、SSEA-4、SOX2、SSEA-1、Nanog、Oct-3/4。结论HAEC可以在体外培养生长并在一定时期内保持其增殖活性;HAEC表达胚胎干细胞相关的表面标志分子。

• 单位
  暨南大学附属第一医院