微小RNA-18a-3p靶向调控HEPN1及对骨肉瘤细胞迁移侵袭的影响

作者：李涛; 李娜; 李佳; 王磊

来源：临床肿瘤学杂志, 2020, 25(05): 412-417.

• 骨肉瘤
• 微小RNA-18a-3p
• 迁移
• 侵袭
• 肝细胞癌下调蛋白1

目的探讨微小RNA-18a-3p(miR-18a-3p)对肝细胞癌下调蛋白1(HEPN1)的靶向调控作用及对骨肉瘤(OS)细胞侵袭迁移的影响。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的GEO数据库中下载基因表达谱OS样本数据集GSE65071的series matrix数据,分析OS患者和健康对照的血浆miR-18a-3p水平;采用实时定量PCR检测OS细胞MG63和成骨细胞h FOB 1. 19的miR-18a-3p和HEPN1 mRNA水平,Western blotting检测HEPN1蛋白水平;脂质体介导miR-18a-3p抑制物转染MG63细胞(Inhibitor组),同时设NC组(转染阴性对照序列)和对照组(仅予脂质体处理而未行转染),活细胞计数(CCK-8)法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数以评估增殖和迁移侵袭能力,构建pmirGLO载体并借助双荧光素酶报告检测系统验证miR-18a-3p与HEPN1间的靶向关系。结果 GSE65071数据集显示,20例OS患者的血浆miR-18a-3p水平为7. 262±0. 494,高于15例健康对照的6. 005±0. 081(P<0. 05)。与h FOB 1. 19细胞相比,MG63细胞的miR-18a-3p水平升高至3. 361±0. 257,而HEPN1 mRNA水平降低至0. 571±0. 068,差异有统计学意义(P<0. 05);与对照组和NC组相比,Inhibitor组的miR-18a-3p水平降低,而HEPN1 mRNA和蛋白水平升高(P<0. 05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-18a-3p模拟物可抑制转染野生型HEPN1 3’端非翻译区质粒的细胞相对荧光素酶活性(P<0. 05),但对转染突变型质粒的细胞无影响(P>0. 05)。与对照组和NC组相比,Inhibitor组转染后24 h的增殖活力有降低趋势(P>0. 05),而转染48～96 h的增殖活力降低(P<0. 05); Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(22. 339±4. 172)%和(153. 673±7. 570)个,均低于对照组的(63. 007±3. 841)%和(365. 336±10. 772)个及NC组的(65. 670±3. 101)%和(366. 335±13. 596)个(P<0. 05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0. 05)。结论 miR-18a-3p在OS中高表达且发挥促癌的作用,下调其表达可抑制OS细胞的增殖和迁移侵袭能力,可能与靶向HEPN1有关,miR-18a-3p/HEPN1轴有可能成为OS治疗的潜在靶点。

• 单位
  神经内科; 青海省人民医院