NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白6对肝缺血再灌注损伤的影响

作者：艾小明; 闫勇; 孙德峰; 王浩; 华志元; 周永平^*

来源：中华肝胆外科杂志, 2023, 29(08).

• 巨噬细胞
• 肝
• 焦亡
• 缺血再灌注损伤

目的观察NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白6(NLRP6)对肝缺血再灌注损伤(IRI)的影响, 并探索相关机制。方法 30只C57BL/6雄性小鼠, 体重(18.80±1.99)g, 分为5组, 每组6只:仅接受剖腹探查的小鼠为假手术组(Sham组);直接制成肝IRI模型的小鼠为IRI组;术前尾静脉注射氯膦酸二钠(Clo)脂质体的小鼠为Clo组;术前尾静脉注射Clo脂质体+骨髓源性巨噬细胞(BMDM)的小鼠为Clo+BMDM组;术前尾静脉注射Clo脂质体+敲除NLRP6基因BMDM的小鼠为Clo+敲除NLRP6组。实时定量聚合酶链反应分析(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测各组小鼠焦亡相关蛋白及因子的表达情况。模拟体外缺氧/复氧(H/R)模型, 设置体外实验组:脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)组、LPS+ATP+敲除NLRP6组、H/R组、H/R+敲除NLRP6组, RT-PCR和蛋白质印迹法检测焦亡相关蛋白及因子的变化。分析核转录因子kappa B(NF-κB)在体内外的表达情况。结果相较于Sham组, IRI组的NLRP6、NLRP3、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、全长焦孔素家族蛋白D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18蛋白表达均增加, 在Clo组中, 由于巨噬细胞被耗竭, 这些蛋白的表达相较于IRI组下降, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。在Clo+BMDM组中, 随着巨噬细胞的重构, NLRP6、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白的表达与Clo组相比再次上升, 而在Clo+敲除NLRP6组, 这些焦亡相关蛋白的表达均较Clo+BMDM组增加, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。LPS+ATP组的焦亡率(16.39±1.06)%低于LPS+ATP+敲除NLRP6组的焦亡率(27.34±2.79)%, 差异具有统计学意义(P<0.001)。H/R组的焦亡率(20.59±5.66)%亦低于H/R+敲除NLRP6组的(37.76±2.00)%, 差异具有统计学意义(P=0.001)。NLRP3、Caspase-1、GSDMD以及IL-1β、IL-18、NF-κB p65在LPS+ATP+敲除NLRP6组中的表达均较LPS+ATP组更强烈, 上述指标在H/R+敲除NLRP6组中的表达较H/R组亦均增强, 差异均具有统计学意义(均P<0.05)。相较于Sham组, NF-κB p65水平在IRI组中提高, 但在Clo组中急剧逆转, 而在Clo+BMDM组中再度回升, 在Clo+敲除NLRP6组中的升高尤为显著。结论巨噬细胞对肝IRI的免疫应答产生关键性影响, NLRP6在其中发挥特异性作用;NLRP6在肝IRI中通过抑制NF-κB调控巨噬细胞的焦亡活动发挥抑炎效能。

• 单位
  江南大学; 南京医科大学