MicroRNA-A6增效的HEV体外瞬时转染HepG2复制体系的建立及鉴定

作者：张伟; 游绍丽; 刘鸿凌; 朱冰; 臧红; 辛绍杰; 荣义辉

来源：肝脏, 2017, 22(10): 899-903.

DOI：10.14000/j.cnki.issn.1008-1704.2017.10.012

• MicroRNA
• 肝炎病毒
• 戊型
• 全长扩增
• 瞬时转染
• 复制力

目的验证HEV编码的MicroRNA-A6对全长HEV瞬转HepG2细胞系中病毒复制的增效作用。方法按照已报道序列合成miR-A6,利用重组PCR、基因克隆以及体外转录技术获得单一高浓度的HEV RNA。HEV RNA与miR-A6按比例采用脉冲电流转染HepG2细胞,转染后24、48和96 h后观察细胞上清IgG分泌和HEV RNA表达载量,与不加miR-A6的HepG2细胞进行比较,分析miR-A6对HEV复制的作用,然后加入anti-A6抑制miR-A6表达,分析其对HEV表达和复制的影响。结果 MiR-A6∶HEV RNA质量比为0.5∶1和1∶1,共转染HepG2细胞后48 h,与单转染HEV RNA相比,lg值升高了1.57和2.44。HEV-IgG先于HEV RNA表达。体外实验显示,Ⅰ型和Ⅳ型HEV复制力没有明显差别,都在转染后48 h达到峰值,加入anti-A6抑制miR-A6后HEV-IgG抑制47.12%,HEV RNA抑制43.3%。结论 MiR-A6可以在体外显著增加HEV RNA瞬转HepG2细胞系中HEV病毒的复制力,为后续HEV分子病毒学和表型耐药研究奠定基础。