两种方法提取人脐带间充质干细胞三维培养生物学特性的比较

作者：陈思铭; 胡加伟; 李丽丽; 伍永强; 彭维杰^*

来源：中国组织工程研究, 2022, 26(19): 2997-3003.

• 干细胞
• 脐带
• 间充质干细胞
• 三维培养
• 细胞球
• 生物学特性
• 免疫表型
• 转录因子

背景:人脐带间充质干细胞提取方法主要有酶消化法和组织块贴壁法,明确两种方法提取的细胞在二维、三维培养下的生物学特性,对组织工程中种子细胞提取方法及培养方式的选择具有重要意义。目的:比较酶消化法和组织块贴壁法提取的人脐带间充质干细胞在二维、三维培养下的生物学特性。方法:酶消化法和组织块贴壁法分离人脐带间充质干细胞,扩增培养至第3代进行二维、三维培养;扫描电镜观察细胞球表征;死活染色观察细胞球存活情况;Alamar Blue检测细胞增殖能力;流式细胞术检测免疫表型CD34、CD44、CD45、CD90、CD105的表达;免疫荧光、免疫印迹检测多能性转录因子Sox2、Nanog、Oct4表达。结果与结论:(1)酶消化法比组织块贴壁法获取细胞时间更短,二维培养下组织块贴壁法的细胞增殖能力优于酶消化法,但在三维培养条件下细胞增殖缓慢且无差异。三维培养3 d后细胞成紧密球体,存活良好。(2)两种方法提取的细胞在二维、三维培养条件下均表达CD44、CD90、CD105,不表达CD34、CD45。二维培养下,酶消化法提取细胞的CD105表达高于组织块贴壁法;三维培养下,酶消化法提取细胞的CD90、CD105表达也高于组织块贴壁法。(3)二维和三维培养下两种方法提取细胞均表达多能性转录因子Sox2、Nanog、Oct4。二维培养下,酶消化法提取细胞3个转录因子表达均高于组织块贴壁法;但三维培养下,组织块贴壁法提取细胞Sox2的表达高于酶消化法,Nanog、Oct4的表达两组间无差异。

• 单位
  赣南医学院