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摘要
目的观察对比神经干细胞(NSC)在Matrigel水凝胶培养和悬浮培养的神经干细胞的生长形态、增殖、分化潜能、细胞产量及存活率等情况。方法分离提取孕12～13 d胎鼠大脑组织中的神经干细胞, 用悬浮培养、三维Matrigel水凝胶支架培养2种培养方案传代神经干细胞, 分别进行形态学观察分析, 免疫组织化学荧光术鉴定巢蛋白(Nestin)和Sox-2的表达, 及流式细胞术鉴定免疫表型;用10%的胎牛血清诱导分化培养基诱导神经干细胞分化后, 行免疫荧光染色鉴定神经干细胞的终末分化细胞:神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞, 对应特异性标记物分别为NeuN、CNPase、GFAP。结果免疫荧光鉴定P1代NSC, Nestin和Sox-2双阳性表达;P2代流式细胞鉴定Nestin∶90%, 证明从胎鼠大脑能够获取纯度较高的神经干细胞;台盼蓝染色计数表明Matrigel基质胶三维培养方案细胞产量明显升高, 是悬浮培养方案的5～10倍, 收取的神经干细胞的存活率较悬浮培养稍增高, 但无统计学差异意义(P=0.0812)。本试验两种方法培养的NSC均具多向分化性能, 均能分化成神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞, 分化后各终末细胞所占比例基本一致(P值分别为:0.1302;0.1108;0.1605)。结论相比于悬浮培养, 三维Matrigel水凝胶支架方案培养出的NSC, 具有活性高, 增殖能力强, 消化后死亡率低, 细胞产量大, 能达到悬浮培养的5倍以上, 能稳定传代及便于细胞形态学观察等优点, 并在连续传至多代后仍能保持NSC的基本特性和多向分化潜能。
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