马铃薯Y病毒衣壳蛋白的表达、纯化与结晶条件筛选

作者：蒋君梅; 杜巧丽; 陈美晴; 严云龙; 谢鑫^*; 李向阳^*

来源：植物保护学报, 2022, 49(02): 508-514.

DOI：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2022.2020170

• 马铃薯Y病毒
• 衣壳蛋白
• 可溶性蛋白
• 表达纯化
• 结晶

为研究马铃薯Y病毒（potato virus Y,PVY）衣壳蛋白（coat protein,CP）在体外表达及CP重组蛋白的晶体生长条件，通过Eco R Ⅰ/Hind Ⅲ酶切及连接技术构建pET-32a-PVY CP原核表达载体，对PVY CP的诱导剂浓度进行优化，利用蛋白质纯化及脱盐技术对PVY CP进行纯化和脱盐，并分析PVY CP重组蛋白的晶体生长条件。结果表明，成功构建了pET-32a-PVY CP原核表达载体；PVY CP在大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞BL21(DE3)原核表达系统中，于16℃下利用0.8 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达可获得高浓度的PVY CP可溶性蛋白；PVY CP重组蛋白在二水甲酸镁处理下可生长出棒状结构晶体。

• 单位
  贵州大学