细胞嗜性差异的2株柯萨奇病毒A10型的构建与拯救

作者：裴捷; 杨祥; 汪梦俊; 刘睿伦; 周金戈; 吕诗韵; 王文辉; 郭靖; 孟胜利; 申硕^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(12): 1437-1442.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003762

• Vero细胞
• 柯萨奇病毒A10型
• 感染性cDNA
• 病毒拯救
• 细胞嗜性

目的 以Vero细胞及人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞嗜性差异的柯萨奇病毒A10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)2个毒株为模板，分别构建感染性克隆，并完成病毒拯救，为CV-A10毒株的细胞嗜性研究奠定基础。方法 分别扩增Vero+/RD+及Vero-/RD+细胞嗜性差异的CV-A10毒株基因组，在5′端引入T7启动子序列，3′端引入polyA尾及NotⅠ酶切位点。将扩增得到的基因组序列与线性化pBR322载体以无缝连接技术连接得到全长质粒，经线性化后分别与T7-RNA聚合酶表达质粒共转染RD细胞完成病毒拯救。通过病毒感染后细胞形态观察及间接免疫荧光试验，比较拯救毒株对Vero细胞嗜性的差异。结果 成功构建了Vero细胞嗜性差异的CV-A10毒株2种感染性克隆，并在RD细胞内完成病毒拯救，序列测定结果表明拯救毒株与亲本毒株序列一致。拯救毒株rCV-A10-010195能够有效感染Vero细胞并形成典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE)，而rCV-A10-3482无法有效感染Vero细胞。结论 建立了2株Vero细胞嗜性差异的CV-A10毒株反向遗传操作系统，为CV-A10毒株细胞嗜性的研究奠定了基础。

• 单位
  武汉生物制品研究所有限责任公司