破骨细胞微管正端蛋白动态成像观察

作者：遆云帆; 徐海栋; 王瑞; 赵建宁

来源：中国骨质疏松杂志, 2015, 21(10): 1165-1173.

• 破骨细胞
• 绿色荧光蛋白
• 活细胞成像
• 细胞骨架
• 微管正端蛋白

目的采用活细胞成像技术观察破骨细胞微管正端蛋白EB1在细胞内的分布及运动,初步研究微管在破骨细胞功能中的作用。方法 1用脂质体转染方法(阳离子脂质体Lip2000)转染EB1-GFP基因至Raw264.7细胞系,G418筛选转染成功的Raw264.7细胞,荧光显微镜下观察后GFP蛋白免疫荧光染色确定稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞系建立;2活细胞工作站下观察转染EB1-GFP的Raw264.7细胞中EB1蛋白的运动;3用含100ng/m LRANKL和30ng/m L M-CSF的培养基分别诱导稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞为破骨细胞,进行TRAP染色鉴定,比较两组细胞形态有无差别;4Raw264.7细胞系诱导出破骨细胞后,用细胞免疫荧光染色方法观察破骨细胞EB1蛋白的形态及分布;5活细胞工作站下观察稳转EB1-GFP的Raw264.7细胞诱导出的破骨细胞内EB1蛋白的运动状态。结果 1脂质体转染方法建立了稳定转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞系;2观察到破骨前体细胞Raw264.7的微管正端蛋白(EB1)的运动轨迹;3转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞诱导的破骨细胞TRAP染色无明显差别;4活细胞工作站观察破骨细胞微管正端蛋白EB1的运动状态,结果表明破骨细胞微管活动性较破骨前体细胞Raw264.7活动性低。结论 1EB1-GFP基因对破骨前体细胞系Raw264.7诱导破骨细胞无明显影响;2微管活动性降低可能与破骨细胞骨吸收活性相关。

• 单位
  南京军区南京总医院