利用新型抗冻蛋白-内含肽标签高效纯化重组蛋白

作者：郑延蓉; 王从纲^*; 孙佳明; 李宪臻

来源：大连工业大学学报, 2022, 41(04): 251-255.

DOI：10.19670/j.cnki.dlgydxxb.2022.0404

• 亲和色谱
• 纯化标签
• 抗冻蛋白
• 内含肽

利用抗冻蛋白AFP的冰结合特性和Mxe GyrA内含肽的可控自切割特性，构建一种以冰为纯化介质，能够可控自切割的纯化标签。以谷胱甘肽硫转移酶(GST)为对象研究其可行性，采用重叠延伸PCR技术和酶切连接技术构建表达载体pET 24a-GST-Mxe GyrA-linker-AFP,在大肠杆菌中成功可溶表达后，利用冰作为吸附介质从细胞破碎上清液中一步分离出融合蛋白GST-Mxe GyrA-linker-AFP。冰融化后，加入终浓度40 mmol/L二硫苏糖醇缓冲液，诱导内含肽N端发生断裂反应形成Mxe GyrA-linker-AFP标签和GST的混合物，再次利用冰吸附去除标签，得到目的蛋白。

• 单位
  大连工业大学; 生物工程学院