一种高效的β地中海贫血CD17(A>T)点突变293T细胞系的建立

作者：刘永祥; 蔡炳; 许言; 曾艳红; 周少虎; 麦庆云

来源：中国临床解剖学杂志, 2022, 40(05): 581-586.

DOI：10.13418/j.issn.1001-165x.2022.5.14

• 地中海贫血
• CRISPR/Cas9
• 同义突变
• 单碱基突变

目的 建立一种高效构建β-地中海贫血CD17(A>T)点突变基因型HEK293T细胞系的方法。方法 利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑技术，即无痕基因组编辑(consecutive re-Guide or re-Cas steps to erase CRISPR/Cas-blocked targets, CORRECT)，通过电转染CRISPR/Cas9质粒诱导HEK293T细胞HBB基因切割，同时以引入有CD17(A>T)点突变和同义突变碱基(G>T)的单链寡核苷酸(singlestranded oligo DNA nucleotides, ssODNs)作为同源模板进行重组，经单克隆筛选、测序验证获得β-珠蛋白基因(HBB)点突变CD17(A>T)基因型HEK293T细胞系。结果 利用“CORRECT”技术成功获得一株β-地贫CD17(A>T)基因型点突变的HEK293T细胞系，同义突变的引入减少Cas9蛋白对靶点不准确的再编辑，提高单碱基突变效率。结论 通过“CORRECT”技术可以高效获得点突变的293T细胞系，对单碱基突变疾病模型的细胞系及动物模型的建立具有重要意义。

• 单位
  广州中医药大学第一附属医院; 中山大学附属第一医院