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摘要
目的探讨circ-PTPN22的翻译能力及其与系统性红斑狼疮(SLE)的关系。方法 2019年5月10日至2019年9月30日分别于西南医院中西医结合风湿免疫科和体检中心收集6例SLE女性患者和9例健康女性对照全血样本, 分离外周血单个核细胞(PBMC), 其中3例SLE和3例健康对照PBMC采用磁珠分选为T、B、NK细胞。通过circRNADb网站预测出circ-PTPN22内部核糖体进入位点(IRES)序列及蛋白序列, 制备针对circ-PTPN22剪接位点处特异氨基酸序列的兔抗circ-PTPN22pro多克隆抗体, Western印迹法检测健康对照和SLE患者PBMC以及T、B、NK细胞亚群中circ-PTPN22pro的表达。将circ-PTPN22-FLAG、circ-PTPN22-NC-FLAG、circ-PTPN22-shRNA-FLAG、circ-PTPN22-shRNA-NC-FLAG重组慢病毒分别转染培养的Jurkat细胞, 以正常培养的细胞作为细胞对照组, Western印迹法检测Jurkat细胞中circ-PTPN22pro蛋白表达, 流式细胞仪检测circ-PTPN22对细胞活化和凋亡的影响。采用两因素重复测量方差分析和两独立样本t检验进行统计分析。结果 circRNAD数据库预测显示, circ-PTPN22具有翻译能力, 且Western印迹显示circ-PTPN22pro蛋白相对分子质量为20 000。转染48 h后, circ-PTPN22-FLAG组circ-PTPN22pro表达明显高于circ-PTPN22-NC-FLAG组和细胞对照组。转染24、48、72 h, circ-PTPN22组白细胞介素2(IL-2)表达(22.20% ± 8.92%、31.10% ± 5.88%、53.20% ± 10.25%)均低于circ-PTPN22-NC组(30.90% ± 11.00%、51.23% ± 10.70%、69.67% ± 9.00%;F = 284.881, P = 0.003);circ-PTPN22-shRNA组IL-2表达(35.57% ± 8.79%、78.10% ± 10.08%、88.63% ± 3.89%)均高于circ-PTPN22-shRNA-NC组(26.73% ± 4.92%、41.03% ± 10.45%、41.33% ± 4.96%;F = 293.818, P = 0.003)。转染48、72、96 h后, circ-PTPN22组、circ-PTPN22-shRNA组细胞凋亡率均分别高于circ-PTPN22-NC组(F = 81.287, P = 0.012)、circ-PTPN22-shRNA-NC组(F = 111.813, P = 0.009)。SLE组PBMC中circ-PTPN22pro表达低于健康对照组, 几乎不表达。SLE组T、B细胞中circ-PTPN22pro表达均显著低于健康对照组(t = 3.047、4.806, P < 0.05), 两组NK细胞中circ-PTPN22pro表达差异无统计学意义(t = 0.582, P > 0.05)。结论 circ-PTPN22可翻译circ-PTPN22pro蛋白, 具有抑制Jurkat细胞活化功能, SLE患者PBMC中circ-PTPN22pro表达低于健康对照, 提示其与SLE发生发展可能存在一定关系。
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