肝毛细线虫体外培养及小鼠感染模型的建立

作者：张雅兰; 朱岩昆; 高丽君; 王磊; 邓艳; 陈伟奇; 许汴利; 蔺西萌; 张红卫^*

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(06): 676-680.

DOI：10.12140/j.issn.1000-7423.2019.06.010

• 肝毛细线虫
• 动物模型
• 小鼠

目的建立肝毛细线虫感染的小鼠模型,为肝毛细线虫病的研究奠定基础。方法在洛阳鼠密度较高地区捕鼠,以人工消化法收集肝毛细线虫阳性鼠肝内的虫卵。将虫卵以不同密度(1 000、 5 000和10 000个/孔)分为3组,每组2孔,于28℃培养至感染期,观察并计数不同培养时长时(18、 21、 23、 25和29 d)感染期虫卵的比例。将感染期虫卵分为两组,分别置于蒸馏水和人工胃液中37℃培养,定期观察有无幼虫孵出。将4周龄雄性昆明小鼠分为8组,每组3只,按5、 10、 20、 60、 100、 200、 500和800个虫卵/只将感染期肝毛细线虫卵通过灌胃感染小鼠,观察小鼠感染后存活情况及是否能成功感染肝毛细线虫。另以16只昆明小鼠作为发育观察组,以60个虫卵/只的感染,分别于感染后14、 18、 21、 29、 35、 55、 90和365 d取2只小鼠处死,解剖取肝脏镜检,观察肝毛细线虫在小鼠体内的发育及繁殖情况。结果共捕鼠17只,肝毛细线虫感染阳性鼠5只,阳性率为5/17;所有阳性鼠均为褐家鼠,褐家鼠阳性率为5/8。新鲜收集的肝毛细线虫虫卵内的卵细胞多处于Ⅲ或Ⅳ细胞期,培养1 d后分裂加速,至第16天开始出现感染期虫卵。1 000、 5 000和10 000个/孔体外培养18、23、 25和29 d时虫卵中感染期虫卵的比例分别为:39.6%(67/169)、 35.2%(45/128)、 21.4%(98/458), 74.0%(148/200)、 75.1%(411/547)、 60.9%(340/558), 88.0%(125/142)、 89.2%(140/157)、 79.3%(168/212)和94.9%(131/138)、 97.0%(254/262)、 88.6%(140/158),各时间点的组间差异均有统计学意义(P <0.05),且10 000个/孔密度条件下的比例均最低。分别在蒸馏水和人工胃液中培养感染期虫卵均无幼虫孵出。感染剂量在200个/只及以下的小鼠均可成功感染肝毛细线虫且未出现死亡;500和800个/只的剂量组小鼠均出现死亡。发育观察组于感染后14 d鼠肝压片查见肝毛细线虫幼虫,未见雌雄分化;感染后18、 21和29 d,肝压片可见肝毛细线虫孕虫;感染后35和55 d均见大量肝毛细线虫虫卵及虫体片段;感染后90、 365 d仅见肝毛细线虫虫卵,无虫体残余组织。结论体外培养可获得感染期肝毛细线虫虫卵,小鼠可作为肝毛细线虫感染的动物模型。

• 单位
  北京热带医学研究所; 河南省疾病预防控制中心; 首都医科大学附属北京友谊医院