基于报告基因的抗CD52单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法的建立

作者：付志浩; 刘春雨; 杨雅岚; 段茂芹; 俞小娟; 崔永霏; 于传飞^*; 王兰^*

来源：微生物学免疫学进展, 2021, 49(06): 23-28.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2021.06.005

• 单克隆抗体
• 抗CD52单克隆抗体
• 抗体依赖性细胞吞噬作用
• 生物学活性
• 报告基因

目的建立基于报告基因的抗CD52单克隆抗体(单抗)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis, ADCP)生物学活性检测方法。方法 (1)以Ramos细胞系作为靶细胞,以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGloTM luciferase assay system)建立抗CD52单抗的ADCP生物学活性检测方法。(2)对单抗量效范围、效靶比及诱导时间进行优化和方法学验证。(3)将本研究建立的方法应用于对不同抗CD52单抗的ADCP生物学活性检测。结果建立抗CD52单抗的ADCP生物学活性检测方法,抗CD52单抗在该方法中存在量效关系,符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D;本方法经优化后确定抗体量效范围为起始工作质量浓度720μg/mL,1∶4倍系列稀释10个稀释度;效靶比为1∶2,诱导时间为20 h;本方法经方法学验证,具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样品经3次测定,相对效价分别为(52.81±5.61)%、(83.66±8.48)%、(100.45±2.65)%、(140.89±8.26)%和(155.10±13.23)%;对应的回收率分别为(105.61±11.22)%、(111.54±11.31)%、(100.45±2.65)%、(112.71±6.61)%和(103.40±8.82)%,上述结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均<11%;且该方法也适用于不同抗CD52单抗的ADCP效应评价。结论利用转基因细胞法成功建立了抗CD52单抗ADCP生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD52单抗的ADCP生物学活性。

• 单位
  中国食品药品检定研究院