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摘要
目的：探讨当归红芪超滤物(UFE-AH)对X射线引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs损伤的保护作用，阐明其可能的机制。方法：体外培养HUVECs，采用不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy) X射线辐射，筛选出最佳辐射剂量(6 Gy)；用不同浓度(0、 50、100、200、400、600、800和1 000μg·L-1 ) UFE-AH干预HUVECs，筛选出最佳促增殖浓度(100、200和400μg·L-1)。实验分为空白组、模型组(6 Gy X射线)、低剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+100μg·L-1 UFE-AH)、中剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+200μg·L-1 UFE-AH)和高剂量UFE-AH组(6 Gy X射线+400μg·L-1 UFE-AH)。CCK-8法检测各组细胞存活率，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，透射电子显微镜下观察各组细胞超微结构，Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)、 B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (caspase-3)蛋白表达水平。结结果果：CCK-8法检测，与0 Gy比较，当辐射剂量大于2 Gy时，辐射后48和72 h X射线对HUVECs的抑制率随辐射剂量增加而升高(P<0.05或P<0.01),6 Gy及6 Gy以上辐射剂量细胞抑制率升高更明显(P<0.01)。与0μg·L-1 UFE-AH比较，100、200、400和600μg·L-1 UFE-AH作用时细胞存活率升高(P<0.05或P<0.01)，且100、200和400μg·L-1 UFE-AH作用24、48和72 h时细胞存活率明显升高(P<0.01)。与空白组比较，模型组细胞存活率明显降低(P<0.01)；与模型组比较，中和高剂量UFE-AH组细胞存活率明显升高(P<0.01)。流式细胞术检测，与空白组比较，模型组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)；与模型组比较，低、中和高剂量UFE-AH组细胞凋亡率均明显降低(P<0.01)。透射电子显微镜观察，空白组细胞膜完整，胞质较均匀，线粒体呈卵圆形，未见明显肿胀，胞内可见少量溶酶体；与空白组比较，模型组细胞重度肿胀，细胞膜多处破损，胞质稀松且出现多个空泡区，细胞核呈轻度不规则形，线粒体数量明显减少，呈轻度或中度肿胀，基质变浅且不均，线粒体少部分嵴局部断裂、变短，胞内可见较大量自噬溶酶体(ASS)；与模型组比较，低、中和高剂量UFE-AH组细胞肿胀减轻，胞内细胞器空泡逐渐减少，线粒体肿胀减轻，数量增多，胞内可见一定量ASS，但仍未恢复正常。Western blotting法检测，与空白组比较，模型组细胞中PI3K、p-Akt、Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax和caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.01)；与模型组比较，中和高剂量UFE-AH组细胞中PI3K、p-Akt、Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.01), Bax和caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值明显降低(P<0.01)。结论：一定剂量的UFE-AH对X射线引起的HUVECs损伤具有保护作用，其机制可能与UFE-AH影响HUVECs中PI3K、Akt、p-Akt、VEGF、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达有关。
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单位甘肃中医药大学; 甘肃中医药大学附属医院
