神经营养素4前导序列介导Exendin-4表达质粒的构建及鉴定

作者：王俊红; 郭永红; 焦杨; 张静; 徐静; 谢璇; 杨广笑; 王全颖; 王枫

来源：神经药理学报, 2012, (03): 22-28.

• 质粒构建
• Exendin-4
• NT4
• 腺伴病毒载体 plasmid construction
• Exendin-4
• NT4
• adeno-associated virus(AAV)

目的:构建神经营养素4前导序列介导的可分泌表达Exendin-4的重组腺伴病毒载体,为探究Exendin-4用于2型糖尿病临床治疗提供实验基础。方法:使用互补引物/模板法及T载体克隆法扩增Exendin-4的cDNA克隆,连接于NT4前导肽序列的3′端,融合基因NT4-Exendin-4亚克隆于穿梭质粒pSSHG,转染HEK-293细胞,包装病毒,斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果:经酶切、测序证实克隆出Exendin-4 cDNA,成功构建同一开放读码框ORF的NT4前导肽Exendin-4 cDNA克隆,得到高滴度(2.5×109pfu·L-1)的重组腺相关病毒。结论:通过分子克隆技术成功...

• 单位
  第四军医大学; 西安交通大学; 西安华广生物工程有限公司