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摘要
目的：产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性。通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体，为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持。方法：利用重组KPC-2免疫双峰骆驼，从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA、逆转录为cDNA通过两轮嵌套式PCR扩增出了纳米抗体片段，构建抗体文库并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体。通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定。结果：构建了一个库容为5.47×108cfu/ml 且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库；并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法；获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5，亲和力分别为6.0nmol/L和4.8nmol/L。且在KPC-2上具有非竞争性两个结合表位。结论：成功淘选出两个不同表位的特异性纳米抗体，有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断。
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单位上海海洋大学; 农业部
