可溶性HLA-G1重链分子的构建、表达及纯化

作者：杨敬宁; 吴雄文; 梁智辉; 陆盛军; 尹姝晗; 蔡蕾; 韩军艳; 黄亚非; 龚非力

来源：中国免疫学杂志, 2005, 21(04): 287-290.

• 人白细胞抗原
• 点突变
• 原核表达
• 蛋白纯化

目的:获取原核表达的可溶性HLA- G1重链分子(heavychainofsolubleHLA G1,sHLA -G1 hc) ,为进一步构建可溶性HLA- G1单体分子奠定基础。方法:应用引物点突变技术,RT -PCR扩增去信号肽的可溶性HLA -G1重链分子的cDNA序列,构建表达载体pET2 2b sHLA -G1 -hc,导入大肠杆菌BL2 1(DE3)Plys,IPTG诱导sHLA-G1- hc- 6 (his融合蛋白表达,提取包涵体蛋白,溶解后经Ni- NTA亲和层析纯化,透析后浓缩保存。SDS PAGE、Westernblot鉴定目的蛋白的表达和纯化。结果:克隆基因序列符合重链基因特征;表达产物以包涵体形式为主,表达量占菌体总蛋白的2 0 % ;纯化后证明表达产物具有较高纯度达到95 %。结论:成功构建可溶性HLA -G1重链分子原核表达载体,为阐明可溶性HLA- G1的功能奠定基础。

• 单位
  华中科技大学同济医学院