miR-17在体外脑缺血损伤中对Smad锚着蛋白的负性调控作用

作者：石晓花; 董玥; 付超; 徐磊; 袁罡; 莽靖; 王姣琦^*; 徐忠信^*

来源：中国实验诊断学, 2020, 24(12): 2020-2024.

• microRNA-17
• SARA
• ActA/Smads

目的探讨microRNA-17(miR-17)在体外脑缺血损伤中对Smad锚着蛋白(Smad anchor for receptor activation,SARA)的调控机制。方法使用大鼠高分化嗜铬细胞瘤PC12细胞,经连二亚硫酸钠(NaS2O4)构建氧糖剥夺模型(Oxygen Glucose Deprivation,OGD),计时0h、1.5h、3h、6h和12h,实时定量PCR检测miR-17的表达变化。利用miR-17mimic瞬时转染PC12细胞,western blot检测转染24h、48h和72h后SARA蛋白表达情况。利用MiRDB和TargetScan网站预测miR-17对SARA的调控位点,并构建双荧光素酶报告基因载体。将报告载体与miR-17mimic共转染,荧光素分析miR-17对SARA的调控靶点。结果 miR-17在OGD损伤早期表达上调,OGD 3h时达高峰,超过OGD 0h组10倍。miR-17mimic转染可显著下调SARA蛋白表达,转染24h组SARA蛋白水平下调了57.01%。MiRDB和TargetScan网站预测miR-17对SARA的调控位点,荧光素酶报告基因检测示位点(57-64)和位点(403-409)是miR-17调控SARA表达的靶点。结论 miR-17可负性调控SARA蛋白表达。

• 单位
  神经内科; 吉林大学中日联谊医院